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糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒如何檢測(cè)雙抗體呢?

2020-08-14 瀏覽次數(shù):1246

   糞便鈣衛(wèi)蛋白是診斷腸炎疾病嚴(yán)重性的一個(gè)指標(biāo),腸炎性疾?。↖BD)患者的糞便鈣衛(wèi)蛋白濃度高,其疾病復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)增大。低糞便鈣衛(wèi)蛋白濃度與腸的同種異體移植排斥的低風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。該檢測(cè)使用特異性單克隆抗體,確保測(cè)試只檢測(cè)到鈣衛(wèi)蛋白。因此糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒是比不可少的。
  糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒用于檢測(cè)雙抗體步驟:
  (1) 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,CALPRO試劑盒,糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。
  (2) 加樣:CALPRO試劑盒,糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
  (3) 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
  (4) 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
  (5) 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
  (6) 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O?D值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,CALPRO試劑盒,糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

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