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介紹糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒的操作步驟
2019-05-20 瀏覽次數(shù)：2603
糞便鈣衛(wèi)蛋白是診斷腸炎疾病嚴(yán)重性的一個指標(biāo)，腸炎性疾病（IBD）患者的糞便鈣衛(wèi)蛋白濃度高，其疾病復(fù)發(fā)的風(fēng)險增大。低糞便鈣衛(wèi)蛋白濃度與腸的同種異體移植排斥的低風(fēng)險相關(guān)。該檢測使用特異性單克隆抗體，確保測試只檢測到鈣衛(wèi)蛋白。因此糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒是比不可少的。
糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒的操作步驟主要分為FC測定抽提步驟和ELISA步驟：
一、FC測定抽提步驟：
1、將空的15ml聚丙烯試管連同接種環(huán)一起稱重，將精密天平歸零。
2、冷凍糞便在室溫下解凍后，用接種環(huán)挑取50~100mg糞便，準(zhǔn)確稱重。
3、按糞便重量(mg):抽提緩沖液體積(ml)=1:49的比例加入抽提緩沖液，蓋上試管。
4、在渦旋振蕩器上渦旋5分鐘，直至混勻。
5、將混勻的液體移入2ml離心管，高速離心5分鐘。
6、將上清液移入標(biāo)記好的試管中。
二、ELISA步驟：檢測前將試劑平衡至室溫
1、用孵育緩沖液將糞便抽提液按照1:150稀釋，充分混勻。
2、將試劑盒中96孔板清洗2遍，甩干。
3、分別吸取100ul稀釋后的樣本，標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品以此類推。
4、用封膜封板，置于水平搖床，18~28°C孵育30分鐘。300轉(zhuǎn)/分鐘。
5、清洗5遍.
6、每孔均加入100ul酶標(biāo)液。
7、用封膜封板，置于水平搖床上，18~28°C孵育30±5分鐘。300轉(zhuǎn)/分鐘。
8、清洗5遍，甩干。
9、每孔均加入100ulTMB底物液。
10、用封膜封板，置于水平搖床上，避光，18~28°C，孵育15±2分鐘。
11、每孔均加入100ul終止液，用吸頭除去氣泡，30分鐘內(nèi)進(jìn)行第13步。
12、用酶標(biāo)儀在450nm處讀數(shù)。
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