技術文章 / article
掌握PeproTech細胞因子溶解稀釋方法的重要性
2020-05-05 瀏覽次數(shù)：2641
一、查看說明書
二、溶解
1. 離心
細胞因子為凍干粉，開蓋*00-12000rpm離心30s。
2. 溶解
根據(jù)說明書紅色標識地方的描述，選擇合適的溶解液，溶解到后邊的濃度范圍內(nèi)。如此可以確保蛋白充分溶解復性，保證產(chǎn)品質(zhì)量。請不要使用非建議溶液溶解。
目的：使細胞因子從無活性的凍干粉狀態(tài)充分溶解復性成為有活性的蛋白溶液。
注意：不要用渦旋振蕩儀劇烈渦旋，可以用槍頭輕輕吹打幾次助溶。有的細胞因子溶解比較慢，需要在室溫靜置或者搖床低速搖一段時間使充分溶解。
3.短期儲存
溶解后的蛋白溶液可以在2-8度儲存1周。
4.長期儲存
如果您的實驗，一周內(nèi)不能用完。必須將第2步中獲得的溶液用含載體蛋白的溶液進一步稀釋。(詳見：三、稀釋)
目的：對溶解的蛋白溶液進行稀釋凍存。加入載體蛋白可以封閉掉管壁上的蛋白結合位點，且可以在低溫下維持細胞因子的穩(wěn)定。
三、稀 釋
1. 配制
配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖的稀釋液備用（確保無菌），這三種稀釋液的配制的Buffer可以用PBS或者細胞基礎培養(yǎng)基。使用以上三種稀釋液的任意一種稀釋重懸的蛋白溶液，稀釋濃度根據(jù)您的使用濃度確定，不要低于10ug/ml。即可分裝成小管，凍存在-20—-80度。
2.使用方法
使用時取用一支凍存的細胞因子，加入到您的培養(yǎng)基中至使用濃度。細胞因子應避免反復凍融。
四、FAQ
1：為什么會有這么多種溶解方法？
A：蛋白的溶解性與很多因素有關，其中比較重要的是pH值和離子強度。PeproTech的細胞因子或重組蛋白在出廠前均經(jīng)嚴格測試，說明書上所標明的溶解液是能夠將該細胞因子或重組蛋白*溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標明的不符，很多時候會造成細胞因子或重組蛋白不能*溶解或者根本無法溶解，這樣所配得的細胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。
2：高于或低于該濃度范圍會有什么問題呢？
A：首先，細胞因子或蛋白會不穩(wěn)定，即很容易出現(xiàn)活性下降的現(xiàn)象。其次，高于這個濃度范圍，可能會超過該蛋白的大溶解濃度，即蛋白無法*溶解。再者，高于或低于該濃度范圍，蛋白可能會出現(xiàn)聚集(aggregation)，終結果還是部分蛋白未溶解，導致蛋白活性的減弱。
3：若想保證溶解液與凍干粉充分混勻，以實現(xiàn)細胞因子或重組蛋白的*溶解，該怎么辦呢？
A：多數(shù)細胞因子或重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的，一般我們用移液槍的槍頭輕吹幾下，即可使細胞因子或重組蛋白*溶解。對于不易溶解的細胞因子或蛋白，PeproTech會在說明書中進行備注(Note)
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